AcidiFluor™ Series
[エンドサイトーシス検出用蛍光プローブ]
570-590 nm：橙色
AcidiFluor ORANGE-Dextranは酸性環境を検出する蛍光プローブの AcidiFluor ORANGEで標識したデキストランです。デキストランは細胞膜透過性のない水溶性多糖類で、エンドサイトーシスの検出に広く用いられています。また、AcidiFluor ORANGE は中性でほとんど蛍光を示さず、酸性で強い蛍光を示す蛍光プローブです。そのためエンドサイトーシスされた小胞が細胞内で酸性化されると明瞭な蛍光を示します。
エンドサイトーシスの検出には一般的に 10 kDa のデキストランが使われます。一方、分子量 70 kDa のデキストランは一般的なエンドサイトーシスではほとんど取り込まれず、マクロピノサイトーシスと呼ばれる特殊なエンドサイトーシスで細胞に取り込まれることが知られています。
これらのことから、 AcidiFluor ORANGE-Dextran 10k, 70kは、それぞれエンドソーム、マクロピノソームの酸性化の検出に使用できます。
| 型番 | 製品名 | 容量 | 希望小売価格（税抜価格） |
|---|---|---|---|
| GC306 | AcidiFluor™ ORANGE-Dextran 10k | 1 mg | ￥ 69,800 |
| AR0312-J1 | AcidiFluor™ ORANGE-Dextran 70k | 1 mg | ￥ 69,800 |
AcidiFluor™ ORANGE-Dextran 10k, 70k
製品情報
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| 名称 | 検出対象 | 反応 | pKa |
Absmax (nm) | FLmax (nm) | ε | Φ |
| AcidiFluor ORANGE-NHS | pH | 可逆 | 5.3, 6.8 | 544 | 565 | 80,000 | 0.7 |
AcidiFluor™ ORANGE-Dextran 10k, 70k
AcidiFluor ORANGE-Dextran 10k および 70k による細胞イメージング例
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HeLa 細胞に取り込まれた AcidiFluor ORANGE-Dextran 10k のライブセルイメージング。HeLa 細胞を 0.2 mg/mL AcidiFluor ORANGE-Dextran 10kを含む培地で 4 時間培養後に蛍光顕微鏡で観察したもの。画像は蛍光像と微分干渉像の重ね合わせで、オレンジの疑似カラーは、ex. 530－560 nm, em. 573－647 nm で撮影した AcidiFluor ORANGE の蛍光像、グレーの疑似カラーは微分干渉像。スケールバーは 50 µm。
HeLa 細胞に取り込まれた AcidiFluor ORANGE-Dextran 70k のライブセルイメージング。HeLa 細胞を 0.2 mg/mL AcidiFluor ORANGE-Dextran 70kを含む培地で 4 時間培養後に蛍光顕微鏡で観察したもの。画像は蛍光像と DIC の重ね合わせで、オレンジの疑似カラーは、ex. 530－560 nm, em. 573－647 nm で撮影した AcidiFluor ORANGE の蛍光像、グレーの疑似カラーは DIC 画像を示す。スケールバーは 50 µm。
基本的には固定細胞では使用できません。リソソームやエンドソームの酸性 pH は生きている細胞の活性によって酸性 pH が保たれており、固定により死んだ細胞ではその酸性が維持されなくなるためです。
ただし、リソソームに局在する AcidiFluor ORANGE、抗体などを標識した AcidiFluor-NHS や HaloTag に結合した HaloTag AcidiFluor ORANGE ligand の局在を知る目的で、固定後速やかに酸性 pH バッファーに置換して蛍光を確認することは可能と考えられます。
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