CaTM-3 AM

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型番 製品名 容量 希望小売価格(円)
GC507 CaTM-3 AM 40 nmol × 5 ¥38,000
  • 赤色蛍光により、GFP などとの共存も可能
  • 高感度にCa2+を検出
  • 細胞内での均質な分布により、CaTM-2 AM より正確にCa2+変動を可視化できるようになりました。

CaTM-3 AM は赤色蛍光(蛍光極大 609 nm)を持つカルシウム検出用の蛍光プローブです。細胞内でのCa2+ 濃度の増減に応じて蛍光が可逆的に変化するため、細胞内でのカルシウム濃度変化を高感度に検出できます。

CaTM-3 AM はアセトキシメチルエステル化されているため、細胞膜を通過後に細胞内のエステラーゼにより加水分解されて水溶性の高いCaTM-3になり、細胞内に比較的均質に滞留します。細胞内での均質な分布により、これまでより正確な Ca2+ の検出が可能になりました。

CaTM-3 AM の特徴

表1. CaTMの物性

Absmax 595 nm

FLmax 609 nm

Kd (Ca2+) 0.19 μM

Φ 0.37


図1 CaTM-3の吸収、蛍光スペクトル

図2 蛍光強度の Ca2+ 依存性

図3 細胞内での均質な分布

HeLa 細胞培養液を HBSS に溶解した 3 μM の CaTM-3 AM に置換し、 37℃で30分間試薬をロードした。Pluronic F-127 などの添加剤がなくとも細胞内に比較的均質に分布している。590 nm で励起し、610-680 nm の蛍光を取得した画像(左)と DIC 画像(右)。

図4 刺激による細胞質でのカルシウム変動の可視化

CaTM-3 AM (3 μM in HBSS) をロードしたHeLa 細胞を 1 μM ヒスタミンで刺激したのち、3分後に 5 μM イオノマイシンでカルシウムを流入させたときの細胞内カルシウム濃度の変動を可視化した。
HeLa 細胞を 1 μM ヒスタミンで刺激したときのカルシウム変動を撮影した動画を、以下のリンクからもご覧いただけます。
https://www.youtube.com/watch?v=-aJYeDSsk8k&feature=share

表2. CaTM-3 AM と他の赤色カルシウムプローブとの比較

CaTM-3 AM CaTM-2 AM Rhod-2 AM Fura-Red AM Rhod-4 AM
Absmax
(nm)
595 597 549 435 530
FLmax
(nm)
609 609 578 639 555
Kd(Ca2+)
(μM)
0.19 0.2 0.57 0.4 0.53
量子収率 0.37 0.39 0.03 0.013
細胞内局在 細胞質+ 核 細胞質 ミトコンドリア 細胞質
(細胞によってはミトコンドリアに濃縮§
添加剤 多くの場合
不要*
Pluronic
F-127
Pluronic
F-127
Pluronic
F-127
Pluronic
F-127
  • HeLa, COS7, A549, CHO-k1, MCF-7, NIH 3T3, HEK293 細胞で確認されている。ラット海馬スライスへのローディングには、Pluronic F-127 を添加した方が良いと報告されている。
  • § A549, NIH 3T3,COS7 細胞など
  • 図1~図4のデータ取得 高橋翔大様(東京大学薬学系研究科)
    CaTM-3 AM は東京大学大学院薬学系研究科 薬品代謝化学教室の花岡健二郎先生のご指導・ご協力のもとで製品化しました。

参考文献

M. Kawatani, M. Kamiya, H. Takahashi, Y. Urano (2018)
Bioorg. Med. Chem. Lett. 28: 1–5 DOI:10.1016/j.bmcl.2017.11.030

K. Hirabayashi, K. Hanaoka, T. Egawa, C. Kobayashi, S. Takahashi, T. Komatsu, T. Ueno, T. Terai, Y. Ikegaya, T. Nagano, Y. Urano (2016)
Cell Calcium 60: 256-265 DOI:10.1016/j.ceca.2016.06.002

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HeLa 細胞を 1 μM ヒスタミンで刺激したときのカルシウム変動を撮影した動画を、以下のリンクからもご覧いただけます。

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