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【細胞内活性酸素種(ROS)検出用蛍光試薬】
HYDROP™

HYDROP はH2O2 (過酸化水素) を特異的に検出する蛍光試薬です。生細胞のイメージングに最適です。

特徴

  • 活性酸素種 (OH, O2−・,ClO, H2O2, 1O2, NO, ONOO 等) の中でも、過酸化水素に特異的に反応して蛍光が増大します。ヒドロキシラジカル、スーパーオキシド、次亜塩素酸、一重項酸素、一酸化窒素、パーオキシナイトライトでは蛍光強度は増加しません。
  • 褪色に強く、細胞内の過酸化水素産生のタイムラプスイメージングにもご使用いただけます。

測定原理

細胞膜透過性のある HYDROP は、細胞内で加水分解されて細胞膜透過性が低下し、細胞内に留まります。また、この反応により過酸化水素との反応性も高まります。 HYDROP は中性水溶液中でほとんど蛍光を発しませんが、過酸化水素と反応することで、強蛍光化合物に変化し(吸収極大波長 492 nm、蛍光最大波長 518 nm)、蛍光強度の増大が観測されます。

HYDROP と活性酸素種との反応選択性

図1. さまざまな活性酸素種に対するHYDROPの反応
図1. さまざまな活性酸素種に対するHYDROPの反応

加水分解された HYDROP と活性酸素種との反応性。過酸化水素水存在下でのみ、顕著な蛍光増大が確認されます。

  • HYDROP 加水分解物 (最終濃度10 μM,コソルベントとして0.1 % DMF) を溶解したリン酸バッファー (0.1 M, pH 7.4) に、以下の活性酸素種生成系を添加 (最終濃度50 μM)。
  • 励起波長490 nm、測定波長520 nm。
各活性酸素種生成条件

O2-・: KO2
H2O2: H2O2, 37℃, 60 min
OH: 過塩素酸鉄(II):H2O2 =10:1, 37℃, 60 min
ONOO: HOONO, 25℃, 5 min
ClO: NaOCl, 25℃, 5 min
TBHP: tert-Butyl hydroperoxide
NO: NOC13, 37℃, 30 min
1O2: EP-1, 37℃, 30 min

HYDROPのスペクトル

HYDROPのスペクトル

HYDROP (最終濃度5 μM, コソルベントとして0.1 % DMF) を溶解したリン酸バッファー (0.1 M, pH 7.4) に、終濃度50 μMになるようH2O2を加え、スペクトルを測定した。

  • 吸収スペクトル: HITACHI U-2910 分光光度計でスリット幅1.5 nmにて測定。
  • 蛍光スペクトル: 励起波長492 nm、HITACHI F-2700 分光蛍光光度計でスリット幅 2.5 nm, フォトマル電圧 700V にて計測。
使用例
使用例
HYDROPを用いて細胞が過酸化水素を産生する様子が可視化できます。 写真は微分干渉像にHYDROP の緑の蛍光シグナルを重ね合わせたもの。 RAW264.7 細胞をphorbol myristate acetate (PMA) で刺激し、H2O2 産生を促進すると、緑で示した HYDROP の蛍光シグナルの増加が確認できます。1 μM HYDROP で 20分間染色。スケールバーは25 μm。

その他の応用例につきましてはアプリケーションノートをご覧ください。

参考文献
Kazuo Tomita, Yoshikazu Kuwahara, Yuko Takashi, Takao Tsukahara, Akihiro Kurimasa, Manabu Fukumoto, Yoshihiro Nishitani, Tomoaki Sato. (2017)
Biochem. Biophys. Res. Commun. 490: 330-335 DOI: 10.1016/j.bbrc.2017.06.044
Kolanowski JL, Kaur A, New EJ. (2016)
Antioxid Redox Signal. 24:713-30
Guo H, Aleyasin H, Dickinson BC, Haskew-Layton RE, Ratan RR (2014)
Cell Biosci. 4:64
Masahiro Abo, Yasuteru Urano, Kenjiro Hanaoka, Takuya Terai, Toru Komatsu, and Tetsuo Nagano
J. Am. Chem. Soc., 2011, 133 (27), pp 10629-10637 doi: 10.1021/ja203521e
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型番 名称 容量 希望小売価格(円) プロトコル MSDS
GC3007-01 HYDROP™ 30nmol×3本 ¥39,800 Download
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