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【活性酸素(ROS)検出用蛍光試薬】
Hydroxyphenyl Fluorescein(HPF) / Aminophenyl Fluorescein(APF)

特長

  • ヒドロキシルラジカル(OH)、パーオキシナイトライト(ONOO)のような強い活性を持つ活性酸素種を他の活性酸素種(O2−・, H2O2, 1O2, NO等)から区別して検出できます。
  • HRPの添加により、過酸化水素(H2O2)の定量が可能です。
  • HPF、APFの併用により次亜塩素酸イオンを特異的に検出できます。
  • 光励起による自動酸化がほとんどないため、既存の活性酸素検出試薬に比べて取扱いが容易で、信頼性の高いデータを得ることが可能です。
  • 生細胞蛍光イメージングが可能です。

測定原理

HPF, APFは中性水溶液中でほとんど蛍光を持ちませんが、これらのプローブが強い活性を持つ活性酸素種と反応すると、強蛍光性化合物であるフルオレセイン(励起波長490 nm、蛍光波長515 nm)が生成し、蛍光強度の増大が観測されます。

Hydroxyphenyl Fluorescein(HPF) / Aminophenyl Fluorescein(APF)

HPF、APFおよびDCFHと活性酸素種との反応性

  • 蛍光プローブ試薬(最終濃度10 μM, コソルベントとして0.1 % DMFを添加)のリン酸バッファー(0.1 M, pH 7.4)溶液に以下の活性酸素種生成系を加えた。
  • HPF、APF、DCFHの蛍光強度はそれぞれ励起波長490, 490, 500 nm, 測定波長515, 515, 520 nmで測定した。

Hydroxyphenyl Fluorescein(HPF) / Aminophenyl Fluorescein(APF)

  1. 過塩素酸鉄(U)100μM H2O2 1 mMを加えた。
  2. ONOOを3μM(最終濃度)加えた。
  3. NaOClを3μM(最終濃度)加えた。
  4. 3(- 1,4-Dihydro-1,4-epidioxy-1-naphthyl)propionic acidを100μM加えた。
  5. KO2を100μM加えた。
  6. H2O2を100μM加えた。
  7. 1-Hydroxy-2-oxo-3-(3-aminopropyl)-3-methyl-1-triazeneを100μM加えた。
  8. 2,2´-Azobis(2-amidinopropane)dihydrochlorideを100μM加えた。
  9. 蛍光プローブ試薬溶液に蛍光灯光を2.5時間照射した。

Hydroxyphenyl Fluorescein(HPF) / Aminophenyl Fluorescein(APF)Hydroxyphenyl Fluorescein(HPF) / Aminophenyl Fluorescein(APF)

使用方法
本品は1 mgがN,N -dimethylformamide(DMF)0.47 mL中に溶解されています。濃度は5 mmol/Lです。使用時にリン酸バッファー(0.1 mol/L,pH7.4)等で500〜5000倍(10〜1 μmol/L)程度に希釈してご使用ください。
試料に調製液を添加し、一定時間反応させた後、励起波長490 nm、測定波長515 nmで蛍光を測定します。

その他の応用例につきましてはアプリケーションノートをご覧ください。

参考文献
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