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AcidiFluor™ ORANGE-NHS に関するQ&A

FAQ1. 標識率の求め方は?
下記公式により求めることが出来ます。
AcidiFluor™ ORANGE-NHSの濃度(分子)を、タンパク質の濃度(分母)で割ることで、「タンパク質1分子あたりに標識されたAcidiFluor™ ORANGE-NHSの分子数」を算出します。

標識率

A544, 280 : 標識体の 544 nm、280 nm における吸光度
CF : Correction Factor (0.12)
εAcidiFluor ORANGE-NHS : AcidiFluor™ ORANGE-NHS のモル吸光係数 (80,000)
εprotein : 標識タンパク質 のモル吸光係数  (IgG の場合、216,000)

FAQ2. 効率よく標識するには?
標識する抗体等、タンパク質は精製されたものを使用することをお勧めします。もし未精製のタンパク質に標識したい場合は、一度限外ろ過やゲルろ過などで夾雑物を除いた後に標識を行ってください。Trisなどアミノ基を含む物質が残存していると、そちらとも色素が反応してしまい、目的物の標識率が下がる原因となります。

ただし、タンパク質1分子あたり7-8個以上の色素がつくと、蛍光シグナルが過剰になってしまったり、タンパク質の物性が変わってしまう可能性も有ります。

FAQ3. 固定細胞にも使えるの?
残念ながら、AcidiFluor™ ORANGE-NHS標識をしたタンパク質を取り込ませた後、細胞を固定すると蛍光を検出することは難しいです。細胞を固定することにより酸性小胞内の酸性環境が維持されなくなり、AcidiFluor™ ORANGE-NHSが光らなくなると想定されるからです。
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